Проверьте зрение за 5 минут, не отходя от компьютера →
Алфавитный указатель по клиническим исследованиям:
А Б В Г Д Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Щ Э

Определение диастазы по Вольгемуту

Принцип. Единица диастазы, или единица Вольгемута (ЕВ), означает то количество фермента, которое может в определенный срок (30 минут) и при одинаковой температуре (38°) расщепить 1 мг крахмала до декстрина, не окрашивающегося йодом.

Методика выполнения. Перенумеровать 12 пробирок. В первую пробирку налить 2 мл содержащего фермент раствора (моча, сыворотка, дуоденальный сок — см. ниже), а в остальные 11 пробирок — по 1 мл 1% раствора хлористого натрия. Затем из первой пробирки перенести 1 мл во вторую пробирку, встряхнуть, из второй пробирки — 1 мл в третью пробирку и т. д. вплоть до 12-й пробирки. 1 мл жидкости, взятой из последней пробирки, вылить. Таким образом получится серия последовательных разведений, причем в каждой пробирке будет содержаться половинное по сравнению с предыдущей пробиркой количество фермента.

Первую пробирку исключают из подсчета. В остальные пробирки, от 2-й до 12-й, прибавляют по возможности быстро (для того, чтобы время воздействия содержащегося в моче фермента было по возможности одинаковым для всех пробирок) по 2 мл 1 % раствора крахмала. После этого все пробирки ставят на 30 минут в водяную баню или в термостат при 38° и затем на несколько минут в очень холодную воду для того, чтобы прекратить действие фермента. Затем в каждую пробирку прибавляют по 2 капли n/50 раствора йода и встряхивают. Пробирки с крахмалом, на который диастаза не подействовала, будут иметь синий цвет, а пробирки с переваренным крахмалом, в зависимости от степени расщепления, — красно-синий (эритро-декстрин), сине-фиолетовый, красно-желтый и желтый цвет. В пробирках с красновато-желтым окрашиванием крахмал расщеплен до ахру-декстрина, который больше не дает реакции с йодом. На нижнюю границу действия фермента в серии разведений указывает первая пробирка сине-красного цвета. Расчет производится следующим образом.

Умножают на 2 число, показывающее степень разведения. Разведение в отдельных пробирках составляет:

I

II

III

IV

V

VI

1 :1

1 :2

1 :4

1 :8

1 :16

1 :32

VII

VIII

IX

X

XI

XII

1:64

1 :128

1 :256

1 :512

1 :1024

1 : 2048

Так, например, если девятая пробирка окрашена в сине-красный цвет, то для расчета берут восьмую пробирку (разведение 1 : 128). Диастатическая активность на 1 мл раствора, содержащего фермент, = 256 ЕВ.

Оценка. Нормальная моча содержит 16 — 64 ЕВ. Более высокие цифры указывают на заболевание поджелудочной железы или по крайней мере на ее вторичное вовлечение в патологический процесс (заболевания желчного пузыря, пенетрирующие язвы желудка и двенадцатиперстной кишки). Очень высокие цифры, до 6000 ЕВ, находят при некрозе поджелудочной железы.

В норме количество диастазы в сыворотке крови равняется 32 ЕВ, в панкреатическом соке — 256 — 2048 ЕВ, верхняя граница нормы после эфирного рефлекса — 8192 ЕВ.

Примечание. Определение диастазы в кале. 5 г свежего кала растирают в ступке с 20 мл 1 % раствора поваренной соли до гомогенной кашицы и оставляют при многократном перемешивании на 30 минут при комнатной температуре. Затем распределяют кашицу в две центрифужные пробирки и центрифугированием отделяют плотные составные части. В отстоявшейся жидкости обычным способом определяют диастазу по Вольгемуту.

Нормальные величины: 32 — 128 ЕВ.

Определение диастазы в панкреатическом соке производится по этому же способу, однако в этом случае ввиду большого содержания фермента целесообразно взять не 2, а 5 мл 1 % раствора крахмала. Отсчет производят после добавления 1 — 2 капель n/10 раствора йода.

Источники ошибок. Раствор крахмала всегда должен быть свежеприготовленным, и его нужно хранить в холодильнике.

Определение диастазы следует по возможности производить в суточной моче (консервирование толуолом), так как содержание ее в отдельных порциях мочи подвержено значительным колебаниям.


Ссылка на данную страницу для форума:
Ссылка на данную страницу для блога:

Алфавитный указатель по клиническим исследованиям:
А Б В Г Д Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Щ Э
Посвящается моему деду, доктору Фролову В.М. (1939-2014) Не пользуйтесь материалами сайта без консультации специалиста!