Проверьте зрение за 5 минут, не отходя от компьютера →
Алфавитный указатель по клиническим исследованиям:
А Б В Г Д Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Щ Э

Определение сывороточных протеаз по Ширге

Тот факт, что в сыворотке крови находятся протеазы, расщепляющие как белковые тела, так и поли-и дипептиды, побудил Ширге предложить новую реакцию. Основываясь на наблюдении, что протеолитические ферменты сыворотки крови отщепляют от пептона Витте свободный триптофан, Ширге разработал методику определения сывороточных протеаз, которая дает надежные результаты также и при болезнях печени.

Принцип. Смешивают сыворотку крови с раствором пептона Витте; после пребывания в термостате к смеси прибавляют раствор уксусной кислоты, содержащий поваренную соль, и удаляют белок погружением в водяную баню с кипящей водой. Затем с помощью водного раствора брома определяют в фильтрате свободный триптофан и измеряют интенсивность цветной реакции.

Необходимые реактивы:

— 5% раствор пептона Витте;

— n/100 раствор уксусной кислоты, содержащий 1% поваренной соли;

— Насыщенный водный раствор брома.

5% раствор пептона приготовляют смешиванием в стакане 5 г пептона Витте («для бактериологических целей») приблизительно с 70 мл дистиллированной воды. Затем жидкость при постоянном помешивании нагревают на водяной бане с кипящей водой до полного растворения. После охлаждения раствор фильтруют в измерительную колбу емкостью 100 мл, предварительно промытую дистиллированной водой, и наполняют водой до метки. В заключение добавляют 3 — 5 капель хлороформа и наслаивают около 2 мл толуола. Этот раствор пептона может сохраняться на льду около 3 дней.

Методика выполнения. В пробирку с 1 мл сыворотки крови (негемолизированной) прибавляют 1 мл 5% раствора пептона Витте, наслаивают несколько капель толуола. Затем пробирку закрывают пробкой и ставят на 24 часа в термостат при температуре 37° (наиболее пригодны пробирки с шлифованными пробками).

После этого добавляют 6 мл п/100 раствора уксусной кислоты, содержащего 1% поваренной соли, и хорошо перемешивают. Затем пробирку (без пробки) переносят в холодную водяную баню, которую нагревают до кипения. После трехминутного кипячения и последующего охлаждения отфильтровывают свернувшийся сывороточный белок и с совершенно прозрачным фильтратом, который только при выраженной желтухе слегка окрашен в желтоватый цвет, проводят реакцию с водным раствором брома. При проведении этой реакции водный раствор брома добавляют очень постепенно маленькими каплями. Для этого пользуются пипеткой с капиллярным кончиком, образующимся, если над пламенем горелки Бунзена вытянуть обыкновенную стеклянную трубку и затем отломить в соответствующем месте.

В норме при такой постановке опыта реакция отрицательна или слабо положительна, причем получается розово-красное, очень слабое окрашивание. Ясный розово-красный цвет означает положительную, отчетливое красное окрашивание — выраженную положительную, а фиолетовый цвет — резко положительную реакцию. Цвет реакции лучше всего наблюдать на белом фоне. Рекомендуется использовать только половину фильтрата, имеющегося в объеме 4 — 5 мл, чтобы иметь возможность повторить реакцию в случае ошибочного добавления слишком большого количества брома.

Оценка. При острых поражениях печени (прежде всего при эпидемическом гепатите), как правило, наблюдается резко положительная реакция, которая по мере выздоровления становится все более слабой и, наконец, переходит в отрицательную.

При подострых и хронических поражениях паренхимы результаты реакции также положительны, хотя здесь они нередко бывают изменчивыми.

Многочисленные другие заболевания, особенно инфекционные, также дают положительные реакции.

Примечание. При данной реакции по Ширге дело идет о комплексе активных поли- и дипептидаз, вследствие чего проба протекает по определенным, свойственным только ей закономерностям, и поэтому не всегда можно установить параллелизм ее с другими функциональными пробами, например с пробами на лабильность сывороточных белков.


Ссылка на данную страницу для форума:
Ссылка на данную страницу для блога:

Алфавитный указатель по клиническим исследованиям:
А Б В Г Д Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Щ Э
Посвящается моему деду, доктору Фролову В.М. (1939-2014) Не пользуйтесь материалами сайта без консультации специалиста!