Проверьте зрение за 5 минут, не отходя от компьютера →
Алфавитный указатель по клиническим исследованиям:
А Б В Г Д Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Щ Э

Определение мочевины по Анбар-Гальону

Принцип. Объемное определение посредством бромистой щелочи. Методика основана на том, что мочевина при добавлении гипобромита натрия разлагается на угольную кислоту, азот и воду по формуле:

СО (NH2)2 + 3NaBrO → СO2 + N2 + 2Н2O + 3NaBr.

Содержание мочевины вычисляют по объему освободившегося азота с учетом температуры и высоты стояния барометра.

Реактивы.

1. 10% раствор трихлоруксусной кислоты.

2. Концентрированный солевой раствор: 150 г сернокислого калия и 350 г поваренной соли в 1 л воды нагревают до кипения, остужают и отфильтровывают нерастворившуюся соль.

3. 40% раствор едкого натра (из очищенного спиртом NaOH).

4. Бром.

Приготовление бромистой щелочи. В смесительном цилиндре с притертой стеклянной пробкой смешивают 20 мл сильно охлажденного раствора едкого натра (3) и 40 капель брома (4). Раствор годен при хранении в холодном темном месте не более нескольких дней.

Рис. 96.
Рис. 96.

Техника определения мочевины в крови с помощью уреометра Коварского.

1. Смешать в центрифужной пробирке равные части сыворотки и трихлоруксусной кислоты (1), хорошо встряхнуть и отцентрифугировать или профильтровать.

2. Наполнить уреометр солевым раствором (2).

При открытых кранах Н1 и нижнем трехходовом кране Н2 (черная точка находится сзади) в правое колено С наливают столько солевого раствора (2), чтобы уровень жидкости в левом колене стоял несколько выше крана H1. Затем закрывают кран Н1 а трехходовой кран Н2 устанавливают таким образом (черная точка должна находиться внизу), чтобы жидкость из части В могла вытекать через отводную трубку D как только откроется кран H1. После этого тщательно удаляют из части А подходящей пипеткой или с помощью водяного насоса остаток жидкости над верхним краном Н1.

3. Прозрачную, лишенную белка и отцентрифугированную сыворотку наливают в часть А аппарата и точно отмечают уровень стояния жидкости. Затем осторожно открывают верхний кран H1 и дают жидкости стечь в часть В в количестве 1,25, 2,5 или 5 мл, в зависимости от ожидаемого содержания мочевины (в нашем примере — 2,5 мл). Тотчас же после этого кран закрывают. Отстаток жидкости в верхней части А удаляют пипеткой и часть А дважды промывают водой при помощи пипетки.

4. Часть А заполняют бромистой щелочью (4), открывают кран Н1 и выпускают 5 мл в часть В. Образующийся тотчас же газ вытесняет жидкость из части В, и она вытекает через отводную трубку D. Через 10 минут образование газа прекращается и опыт заканчивается.

5. Затем трехходовой кран Н2 устанавливают таким образом, чтобы оба колена сообщались друг с другом (черная точка находится сзади).

Поворачивают кран дальше (черная точка идет кверху) до тех пор, пока правое колено С не будет сообщаться с отводной трубкой, так что солевой раствор может вытекать из части С. Выпускают столько жидкости, чтобы уровни в трубках В и С сравнялись, что произойдет, когда после поворота трехходового крана Н2 (черная точка сзади) снова возобновится сообщение между обоими столбами жидкости.

6. Объем газа определяется по делениям шкалы.

Расчет. Отметить температуру и показания барометра и по таблице определить соответствующий им фактор (см. ниже). Умножение найденного по таблице, фактора на объем газа дает количество мочевины в граммах на 1 л неразведенного исходного материала. Одновременно ставят также контрольный опыт с 5 мл бромистой щелочи, применяемой трихлоруксусной кислотой и водой. Полученную величину вычитают из данных пробы.

Таблица рассчитана только на применение 2,5 мл сывороточного центрифугата (1,25 мл сыворотки). Если применяют 5 мл центрифугата, то полученный фактор делят пополам, а при использовании 1,25 мл центрифугата, напротив, удваивают.

Пример. Взято 2,5 мл центрифугата (1,25 мл неразведенной сыворотки).

Показание барометра — 760 мм. Температура — 20°. Фактор — 1,96. Объем газа 0,18 мл N2. Контроль — 0,02 мл N2. Объем газа 0,18 минус контроль 0,02 = 0,16 умножить на фактор 1,96 = 0,31 г мочевины в 1 л неразведенной анализируемой жидкости, следовательно, 31 мг% мочевины.


Ссылка на данную страницу для форума:
Ссылка на данную страницу для блога:

Алфавитный указатель по клиническим исследованиям:
А Б В Г Д Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Щ Э
Посвящается моему деду, доктору Фролову В.М. (1939-2014) Не пользуйтесь материалами сайта без консультации специалиста!